2025-03-21 灵灵一
1.克隆质粒载体
(1)定义:
克隆质粒载体主要用于携带和扩增DNA片段或外源基因,是基因工程中保存和扩增基因片段的重要手段。
(2)特点:
通常具有高拷贝数、多克隆位点、抗生素抗性基因等特性,便于在宿主细胞中复制和筛选。
(3)常见类型:
①pBR322质粒:是最早广泛使用的大肠杆菌克隆载体之一,具有两个抗生素抗性基因(AmpR和TetR)和多个限制酶切位点。
②pUC系列质粒:如pUC18、pUC19等,是小型、高拷贝数的克隆载体,常用于基因克隆和测序。
③T载体:一种简单的克隆载体,通常只含有一个复制起始位点和抗生素抗性基因。
2.表达质粒载体
(1)定义:
表达质粒载体在克隆载体的基础上加入了表达调控元件(如启动子、终止子等),使外源基因能够在宿主细胞中表达所需的蛋白质。
(2)特点:
具有强大的启动子、转录终止子、核糖体结合位点等表达调控元件,能够高效表达外源基因。
(3)常见类型:
①pET系列质粒:用于大肠杆菌中蛋白表达的常见载体,具有高拷贝数、强大的启动子和用于蛋白纯化的元素(如His标签)。
②pcDNA系列质粒:广泛应用于真核细胞中的基因表达,具有强大的启动子、选择性标记基因(如抗生素耐受基因)以及细胞定位信号等元素。
③pGEX系列质粒:常用于大肠杆菌中进行融合蛋白表达,含有GST(谷胱甘肽S-转移酶)标签,便于后续纯化。
3.特殊用途质粒载体
(1)BAC(细菌人工染色体)质粒:一类大型质粒,通常用于携带大片段基因组DNA,有助于在真核生物中稳定传递、表达和研究整个基因组的特定区域。
(2)AAV(腺相关病毒)质粒:被广泛用于基因传递研究,能有效地将外源基因导入目标细胞,适用于基因治疗和基因编辑等领域。
(3)酵母质粒:常用于酵母细胞的基因表达和研究,包含适用于酵母的启动子和选择性标记基因。
4.其他类型
(1)穿梭载体:含有原核和真核两个复制子,能在原核和真核细胞中复制,并可以在真核细胞中有效表达。
(2)RNAi质粒载体:用于介导RNA干扰(RNA interference),通常包含一个RNAi导体,其中包含外源基因的靶向序列和一个RNAi表达序列。