名称: | pAAVS1-PC-GCaMP6f-MCOLN1(human)-Puro |
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别称: | NM_020533.3;LECD; MG-2; ML1; ML4; MLIV; MST080;MSTP080; TRP-ML1; TRPM-L1; TRPML1 |
基因长: | 1743bp |
质粒宿主: | 哺乳细胞 |
质粒用途: | 基因敲入 |
片段类型: | CRISPR,ORF |
片段物种: | 人 |
原核抗性: | Amp |
筛选标记: | Puro |
荧光标记: | |
启动子: | CAG |
复制子: | pUC |
拷贝数: | |
感受态: | Stbl3 |
温度: | 37度 |
背景载体: | pAAVS1-PC-GCaMP6f-Puro |
正向引物: | |
反向引物: | |
诱导方式: |
1、本平台所有产品仅供科研使用,不能用于临床试验,包括人体口服、注射或者体外用药;
2、小包装质粒以模板价格出售,只保证基因部分测序正确,不保证质粒的表达等实验效果;
3、某些质粒即使是出品公司亦没有完整测过序,如关键部位的序列测序正确,亦认为是正确质粒;
4、小包装质粒产品的售后期为您收到产品之日起3个月,收到质粒后请及时转化操作,过期需重新购买;
5、质粒构建皆收取的是成本费用,所有质粒会分享给其他实验者,保密性质粒请提前告知并缴纳保密费用;
6、因科学研究为探索未知的活动,存在较大不确定性,故在任何情况下淼灵都不承担额外的连带责任;
7、发表[中文论文]请标注:产品名称(产品货号) 由武汉淼灵生物科技有限公司提供;
8、发表[英文论文]请标注:Product Name (Product Item Number) was obtained from MiaoLingBio,China.
pAAVS1-PC-GCaMP6f-MCOLN1(human)-Puro是哺乳细胞即系敲入质粒,可将MCOLN1基因有效敲进细胞制定位置。质粒带有Puro抗性,便于阳性细胞筛选。
操作说明
一、质粒干粉(负20度保存,保质期90天,常温运输)
1、收到干粉质粒后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒;
2、将相应的感受态于冰盒上解冻,取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴 30min;
3、42度热激60s,冰浴2min,加入900μl无抗LB培养基,180rpm震荡培养45min;
4、6000rpm离心3min,留100μl上清重悬,再涂至对应抗性的LB平板上;
5、倒置培养过夜后,如菌落过多则稀释质粒转化,如没有菌落则取10ul质粒转化;
6、挑单菌落至对应抗性的LB液体培养基中过夜震荡培养,根据需要提取质粒。
二、液体质粒(负20度保存,保质期90天,冰袋运输)
1、收到液体质粒后请甩动保存管,让液体质粒不要吸附在管壁上;
2、根据实验需求取适量质粒,其余保存于负20度冰箱。
三、甘油菌种(负80度保存,保质期90天,冰袋运输)
1、收到甘油菌种后请甩动保存管,让菌液不要吸附在管壁上;
2、用接种环在固体平板上四区划线,如有抗性就加对应抗性;
3、恒温培养箱倒置培养12~16h;
4、务必挑取单菌落接种于液体培养基中,如有抗性就加对应抗性;
5、摇床震荡培养过夜,根据实验需要培养菌种。
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GAGGAGGGGG
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CAAGAAGATC
CTTTGATCTT
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CCCCAGTGCT
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ACGCTCACCG
GCTCCAGATT
TATCAGCAAT
AAACCAGCCA
GCCGGAAGGG
CCGAGCGCAG
AAGTGGTCCT
GCAACTTTAT
CCGCCTCCAT
CCAGTCTATT
AATTGTTGCC
GGGAAGCTAG
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GCCATTGCTA
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GGTGTCACGC
TCGTCGTTTG
GTATGGCTTC
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CCGGCGTCAA
TACGGGATAA
TACCGCGCCA
CATAGCAGAA
CTTTAAAAGT
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GGGTGAGCAA
AAACAGGAAG
GCAAAATGCC
GCAAAAAAGG
GAATAAGGGC
GACACGGAAA
TGTTGAATAC
TCATACTCTT
CCTTTTTCAA
TATTATTGAA
GCATTTATCA
GGGTTGAATT
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