产品货号：P72227
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一键复制产品信息
| 名称: | pLV3-CMV-PRPF6(human)-EF1a-CopGFP-Puro |
|---|---|
| 别称: | NM_012469.4:ANT-1; ANT1; C20orf14; hPrp6; Prp6; RP60; SNRNP102; TOM; U5-102K |
| 基因长: | 2823bp |
| 质粒宿主： | 哺乳细胞,慢病毒 |
| 质粒用途： | 蛋白表达 |
| 片段类型： | ORF |
| 片段物种： | 人 |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | Puro |
| 荧光标记： | 绿色 |
| 启动子: | CMV |
| 复制子: | pUC |
| 拷贝数: | |
| 感受态: | Stbl3 |
| 温度: | 37度 |
| 背景载体: | pLV3-CMV-MCS2-EF1a-CopGFP-Puro |
| 正向引物: | CMV-F |
| 反向引物: | |
| 诱导方式: |
1、本平台所有产品仅供科研使用，不能用于临床试验，包括人体口服、注射或者体外用药；
2、小包装质粒以模板价格出售，只保证基因部分测序正确，不保证质粒的表达等实验效果；
3、某些质粒即使是出品公司亦没有完整测过序，如关键部位的序列测序正确，亦认为是正确质粒；
4、小包装质粒产品的售后期为您收到产品之日起3个月，收到质粒后请及时转化操作，过期需重新购买；
5、质粒构建皆收取的是成本费用，所有质粒会分享给其他实验者，保密性质粒请提前告知并缴纳保密费用；
6、因科学研究为探索未知的活动，存在较大不确定性，故在任何情况下淼灵都不承担额外的连带责任；
7、发表[中文论文]请标注：产品名称(产品货号) 由武汉淼灵生物科技有限公司提供；
8、发表[英文论文]请标注：Product Name (Product Item Number) was obtained from MiaoLingBio,China.
pLV3-CMV-PRPF6(human)-EF1a-CopGFP-Puro是适用于哺乳细胞过表达的质粒。质粒带有的CMV强启动子可启动人源PRPF6基因转。此外，质粒带有HIV-1 Ψ和3'/5'LTR元件可用于慢病毒包装，便于基因稳定整合至宿主细胞。质粒携带的CopGFP绿色荧光蛋白用于观察目的基因的表达和定位情况。质粒携带Puro抗性基因，用于筛选表达目的基因的宿主细胞。
操作说明
一、质粒干粉（负20度保存，保质期90天，常温运输）
1、收到干粉质粒后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒；
2、将相应的感受态于冰盒上解冻，取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴 30min；
3、42度热激60s，冰浴2min，加入900μl无抗LB培养基，180rpm震荡培养45min；
4、6000rpm离心3min，留100μl上清重悬，再涂至对应抗性的LB平板上；
5、倒置培养过夜后，如菌落过多则稀释质粒转化，如没有菌落则取10ul质粒转化；
6、挑单菌落至对应抗性的LB液体培养基中过夜震荡培养，根据需要提取质粒。
二、液体质粒（负20度保存，保质期90天，冰袋运输）
1、收到液体质粒后请甩动保存管，让液体质粒不要吸附在管壁上；
2、根据实验需求取适量质粒，其余保存于负20度冰箱。
三、甘油菌种（负80度保存，保质期90天，冰袋运输）
1、收到甘油菌种后请甩动保存管，让菌液不要吸附在管壁上；
2、用接种环在固体平板上四区划线，如有抗性就加对应抗性；
3、恒温培养箱倒置培养12~16h；
4、务必挑取单菌落接种于液体培养基中，如有抗性就加对应抗性；
5、摇床震荡培养过夜，根据实验需要培养菌种。
ACGCGTGTAG
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GTCTTGCAAC
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TGAGTTAGCA
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CAAGGAGAGA
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TGCATGCCGA
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GCAGTTAATC
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CCGCGCCCCT
CGGCTACGTG
CCGGGGCTGG
GCCGGGGCGC
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ACCACGCGGT
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GCGATATCCA
GCGCGGCCGC
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GGTGCCCGTC
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CTCTGGTTAG
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TCCGCCCATT
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CGGTTTGCGT
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GCAGCACTGC
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GGGATAATAC
CGCGCCACAT
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CATCATTGGA
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CAGTTCGATG
TAACCCACTC
GTGCACCCAA
CTGATCTTCA
GCATCTTTTA
CTTTCACCAG
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CAGGAAGGCA
AAATGCCGCA
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TAAGGGCGAC
ACGGAAATGT
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TACTCTTCCT
TTTTCAATAT
TATTGAAGCA
TTTATCAGGG
TTATTGTCTC
ATGAGCGGAT
ACATATTTGA
ATGTATTTAG
AAAAATAAAC
AAATAGGGGT
TCCGCGCACA
TTTCCCCGAA
AAGTGCCACC
TGACGTCTAA
GAAACCATTA
TTATCATGAC
ATTAACCTAT
AAAAATAGGC
GTATCACGAG
GCCCTTTCGT
CTCGCGCGTT
TCGGTGATGA
CGGTGAAAAC
CTCTGACACA
TGCAGCTCCC
GGAGACGGTC
ACAGCTTGTC
TGTAAGCGGA
TGCCGGGAGC
AGACAAGCCC
GTCAGGGCGC
GTCAGCGGGT
GTTGGCGGGT
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AGCAGATTGT
ACTGAGAGTG
CACCATATGC
GGTGTGAAAT
ACCGCACAGA
TGCGTAAGGA
GAAAATACCG
CATCAGGCGC
CATTCGCCAT
TCAGGCTGCG
CAACTGTTGG
GAAGGGCGAT
CGGTGCGGGC
CTCTTCGCTA
TTACGCCAGC
TGGCGAAAGG
GGGATGTGCT
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GCCAGTGCCA
AGCTG
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