产品货号：P71996
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一键复制产品信息
| 名称: | pLV3-CMV-EGFP-Hif1a(mouse)-3×FLAG-Puro |
|---|---|
| 别称: | NM_001313919.2;bHLHe78; HIF-1-alpha; HIF1-alpha;HIF1alpha; MOP1 |
| 基因长: | 2511bp |
| 质粒宿主： | 哺乳细胞,慢病毒 |
| 质粒用途： | 蛋白表达 |
| 片段类型： | ORF |
| 片段物种： | 小鼠 |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | Puro |
| 荧光标记： | 绿色 |
| 启动子: | CMV |
| 复制子: | pUC |
| 拷贝数: | |
| 感受态: | Stbl3 |
| 温度: | 37度 |
| 背景载体: | pLV3-CMV-EGFP-MCS-3×FLAG-Puro |
| 正向引物: | pEGFP-C-5' |
| 反向引物: | |
| 诱导方式: |
1、本平台所有产品仅供科研使用，不能用于临床试验，包括人体口服、注射或者体外用药；
2、小包装质粒以模板价格出售，只保证基因部分测序正确，不保证质粒的表达等实验效果；
3、某些质粒即使是出品公司亦没有完整测过序，如关键部位的序列测序正确，亦认为是正确质粒；
4、小包装质粒产品的售后期为您收到产品之日起3个月，收到质粒后请及时转化操作，过期需重新购买；
5、质粒构建皆收取的是成本费用，所有质粒会分享给其他实验者，保密性质粒请提前告知并缴纳保密费用；
6、因科学研究为探索未知的活动，存在较大不确定性，故在任何情况下淼灵都不承担额外的连带责任；
7、发表[中文论文]请标注：产品名称(产品货号) 由武汉淼灵生物科技有限公司提供；
8、发表[英文论文]请标注：Product Name (Product Item Number) was obtained from MiaoLingBio,China.
pLV3-CMV-EGFP-Hif1a(mouse)-3×FLAG-Puro是适用于哺乳细胞过表达的质粒。质粒带有的CMV强启动子可启动小鼠源源Hif1a基因转录，促进Hif1a基因C端融合表达3×FLAG标签，便于FLAG抗体对表达的融合蛋白进行检测、定位和纯化等。此外，质粒带有HIV-1 Ψ和3'/5'LTR元件可用于慢病毒包装，便于基因稳定整合至宿主细胞。质粒携带的EGFP绿色荧光蛋白用于观察目的基因的表达和定位情况。质粒携带Puro抗性基因，用于筛选表达目的基因的宿主细胞。
操作说明
一、质粒干粉（负20度保存，保质期90天，常温运输）
1、收到干粉质粒后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒；
2、将相应的感受态于冰盒上解冻，取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴 30min；
3、42度热激60s，冰浴2min，加入900μl无抗LB培养基，180rpm震荡培养45min；
4、6000rpm离心3min，留100μl上清重悬，再涂至对应抗性的LB平板上；
5、倒置培养过夜后，如菌落过多则稀释质粒转化，如没有菌落则取10ul质粒转化；
6、挑单菌落至对应抗性的LB液体培养基中过夜震荡培养，根据需要提取质粒。
二、液体质粒（负20度保存，保质期90天，冰袋运输）
1、收到液体质粒后请甩动保存管，让液体质粒不要吸附在管壁上；
2、根据实验需求取适量质粒，其余保存于负20度冰箱。
三、甘油菌种（负80度保存，保质期90天，冰袋运输）
1、收到甘油菌种后请甩动保存管，让菌液不要吸附在管壁上；
2、用接种环在固体平板上四区划线，如有抗性就加对应抗性；
3、恒温培养箱倒置培养12~16h；
4、务必挑取单菌落接种于液体培养基中，如有抗性就加对应抗性；
5、摇床震荡培养过夜，根据实验需要培养菌种。
ACGCGTGTAG
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GCTCCCGGAG
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GGGAGCAGAC
AAGCCCGTCA
GGGCGCGTCA
GCGGGTGTTG
GCGGGTGTCG
GGGCTGGCTT
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CACAGATGCG
TAAGGAGAAA
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CGCCATTCAG
GCTGCGCAAC
TGTTGGGAAG
GGCGATCGGT
GCGGGCCTCT
TCGCTATTAC
GCCAGCTGGC
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GGCGATTAAG
TTGGGTAACG
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CCCAGTCACG
ACGTTGTAAA
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