名称: | pCMV-Lrp5(mouse)-3×FLAG-Neo |
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别称: | NM_008513.3;BMND1; HBM; LR3; LRP7; mKIAA4142; OPPG |
基因长: | 4845bp |
质粒宿主: | 哺乳细胞 |
质粒用途: | 蛋白表达 |
片段类型: | ORF |
片段物种: | 小鼠 |
原核抗性: | Amp |
筛选标记: | Neo/G418 |
荧光标记: | |
启动子: | CMV |
复制子: | pUC |
拷贝数: | |
感受态: | DH5a |
温度: | 37度 |
背景载体: | |
正向引物: | CMV-F:CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG |
反向引物: | |
诱导方式: |
1、本平台所有产品仅供科研使用,不能用于临床试验,包括人体口服、注射或者体外用药;
2、小包装质粒以模板价格出售,只保证基因部分测序正确,不保证质粒的表达等实验效果;
3、某些质粒即使是出品公司亦没有完整测过序,如关键部位的序列测序正确,亦认为是正确质粒;
4、小包装质粒产品的售后期为您收到产品之日起3个月,收到质粒后请及时转化操作,过期需重新购买;
5、质粒构建皆收取的是成本费用,所有质粒会分享给其他实验者,保密性质粒请提前告知并缴纳保密费用;
6、因科学研究为探索未知的活动,存在较大不确定性,故在任何情况下淼灵都不承担额外的连带责任;
7、发表[中文论文]请标注:产品名称(产品货号) 由武汉淼灵生物科技有限公司提供;
8、发表[英文论文]请标注:Product Name (Product Item Number) was obtained from MiaoLingBio,China.
操作说明
一、质粒干粉(负20度保存,保质期90天,常温运输)
1、收到干粉质粒后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒;
2、将相应的感受态于冰盒上解冻,取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴 30min;
3、42度热激60s,冰浴2min,加入900μl无抗LB培养基,180rpm震荡培养45min;
4、6000rpm离心3min,留100μl上清重悬,再涂至对应抗性的LB平板上;
5、倒置培养过夜后,如菌落过多则稀释质粒转化,如没有菌落则取10ul质粒转化;
6、挑单菌落至对应抗性的LB液体培养基中过夜震荡培养,根据需要提取质粒。
二、液体质粒(负20度保存,保质期90天,冰袋运输)
1、收到液体质粒后请甩动保存管,让液体质粒不要吸附在管壁上;
2、根据实验需求取适量质粒,其余保存于负20度冰箱。
三、甘油菌种(负80度保存,保质期90天,冰袋运输)
1、收到甘油菌种后请甩动保存管,让菌液不要吸附在管壁上;
2、用接种环在固体平板上四区划线,如有抗性就加对应抗性;
3、恒温培养箱倒置培养12~16h;
4、务必挑取单菌落接种于液体培养基中,如有抗性就加对应抗性;
5、摇床震荡培养过夜,根据实验需要培养菌种。
GACGGATCGG
GAGATCTCCC
GATCCCCTAT
GGTGCACTCT
CAGTACAATC
TGCTCTGATG
CCGCATAGTT
AAGCCAGTAT
CTGCTCCCTG
CTTGTGTGTT
GGAGGTCGCT
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CGAGCAAAAT
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CTGCTTCGCG
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ATGGGTGGAG
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TCAATGACGG
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CTACTTGGCA
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GTATTAGTCA
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CATGGTGATG
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AGTACATCAA
TGGGCGTGGA
TAGCGGTTTG
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CTCCACCCCA
TTGACGTCAA
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GCAGAGCTCT
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GGCCCCTCCG
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CTGTACTGCA
GCTTGGTCCC
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AAGTGCTGAG
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GTACTGGACT
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GACTGGAACC
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CTGTGACCTC
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CTGGATCGAC
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TGCCAGCGCT
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CGGCTCCAGA
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CCGGGAAGCT
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TACAGGCATC
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CGAGTTACAT
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GCTCCTTCGG
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GCGGCGACCG
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GCCCGGCGTC
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AATACCGCGC
CACATAGCAG
AACTTTAAAA
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TTGGAAAACG
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ACCGCTGTTG
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CGATGTAACC
CACTCGTGCA
CCCAACTGAT
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AAAAACAGGA
AGGCAAAATG
CCGCAAAAAA
GGGAATAAGG
GCGACACGGA
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ACTCATACTC
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AATATTATTG
AAGCATTTAT
CAGGGTTATT
GTCTCATGAG
CGGATACATA
TTTGAATGTA
TTTAGAAAAA
TAAACAAATA
GGGGTTCCGC
GCACATTTCC
CCGAAAAGTG
CCACCTGACG
TC